多聚酶链反应(PCR)是分子生物学的重要技术之一,广泛应用于基因克隆、遗传分析、病原微生物检测等领域。它是以DNA为模板,在辅助酶的作用下,进行DNA分子间定向扩增,增大DNA数量,扩大检测范围。
PCR技术的实质是在特定引物的作用下,使目标DNA片段经历一个循环反复的过程,经增幅可以产生大量特异性DNA片段,从而得到大量目标DNA片段。
那么PCR的实现流程是怎样的呢?
Step1. 取得DNA提取物,设计适当的引物,以目的DNA序列为靶标。
Step2. 将样品DNA加入扩增体系中。
Step3. 在高温条件下,将DNA序列失去完全配对的双链完全分离成单链。
Step4. 降温以使引物与模板DNA能出现比较充分的配对并稳定结合在一起。
Step5. 通过耐热性酶在RT-PCR中反复扩增,最终得到足够多的目标DNA片段。
以上就是PCR的基本原理和实现流程。PCR技术的范畴是极为广泛的,应用领域包括疾病诊断、药物研发、生物学研究等。PCR技术的精准性和灵敏性优势,也使其成为目前最可靠的DNA检测方法之一。