纯化核酸是进行基因工程、生命科学等领域的基础,也是血液检测、药物筛选等众多领域的重要步骤。下面介绍一下纯化核酸的方法和步骤。
一、提取DNA、RNA
1. 细胞破碎:细胞膜和核膜必须先被破开才能取出DNA、RNA。
2. 加入蛋白酶和胰蛋白酶消化膜蛋白等有机物质。
二、纯化DNA、RNA
1. 将DNA或RNA样品与固相材料(硅胶或树脂)混合,在制备的小柱子中过滤。主要是利用DNA或RNA在特定条件下,与固相材料结合或不结合来分离。
2. 去除小柱子中的杂质。通过高盐浓度、酸性、甲醇等不同方法,让核酸分离出来,同时去除混合物,使样品得到纯净的核酸。
三、质量检测
1. 酶联免疫吸附检测(ELISA):通过将核酸与酶标记结合的抗体结合,来检测出核酸存在的浓度。同时ELISA也被用来检测样品是否存在蛋白质污染。
2. 吸收光谱法:核酸有着特有的吸收光谱。可以通过检测不同波长下样品的吸收情况以及吸收率来确定核酸的纯度。